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Étude analytique de l’allergie au pollen de cyprès : aspects moléculaires et particulaires
Le pollen de cyprès représente une source allergénique importante et très invasive dans de nombreuses régions à travers le monde. Nos investigations se sont focalisées sur l’identification et la caractérisation des principaux allergènes impliqués dans l’allergie au pollen de cyprès. Différents protocoles d’extraction ont été développés afin de solubiliser les protéines hydrosolubles et non hydrosolubles du pollen de cyprès. L’analyse, par une approche protéomique (gel 1D, 2D et LC/MS/MS) et immunochimique grâce à 120 sérums de patients italiens et français allergiques au pollen de cyprès, nous a permis de classer les différents profils de sensibilisations IgE et d’identifier de nouvelles protéines IgE réactives dans le pollen de cyprès. La caractérisation biochimique des allergènes comprenait la détermination de leur point isoélectrique, de leur masse moléculaire, de la nature peptidique ou oligosaccharadique des épitopes reconnues ainsi que l’analyse de leurs allergénicités en conditions réductrice et dénaturante. L’adaptation de l’électrophorèse double monodimensionelle (D1-DE) à l’analyse allergomique nous a permis d’isoler de plus importantes quantités de protéine et de déterminer, par un criblage simultané d’un nombre important de sérums, la fréquence de la réactivité IgE vis-à-vis des allergènes d’intérêt. Les profils de réactivité IgE des patients italiens et français ont également été comparés en microarray sur 103 allergènes différents et corrélés aux résultats de nos immunoempreintes. La technologie d’enrichissement des protéines par des collections de ligands peptidiques nous a permis d’enrichir nos extraits de pollen en protéines moyennement ou faiblement abondantes. L’utilisation de ce nouvel outil protéomique nous a permis d’étendre considérablement le répertoire des allergènes identifiables en MS/MS.
Les nombreuses méthodes analytiques utilisées tout au long de cette thèse ont démontré la diversité de la réponse IgE des patients allergiques au pollen de cyprès ainsi que la diversité du répertoire des allergènes impliqués dans cette pathologie.